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RNA亲和纯化测序(RAP-seq)
与RIP-seq(RNA免疫共沉淀测序)相比,RAP-seq无需特异抗体性,无需遗传转化,高效鉴定RNA结合蛋白与RNA的相互作用,助力RNA结合蛋白(RBP)调控机制研究
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RNA凝胶迁移或电泳迁移率实验(RNA-EMSA)
RNA-EMSA(RNA-Electrophoretic Mobility Shift Assay)是一种快速灵敏的检测蛋白-RNA互作的技术方法,RNA-EMSA是将标记的RNA与蛋白质共同孵育,当形成复合物后,通过非变性聚丙烯酰胺凝胶对RNA-蛋白质复合体进行电泳。 与游离的RNA探针相比,RNA-蛋白质复合体的迁移速度较慢,可以在凝胶上观察到阻滞条带。通过RNA-EMSA实验可以检测或验证RNA与蛋白质的相互作用、蛋白质在RNA上的结合序列等。
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RNA Pull Down
RNA Pull Down是根据已知的RNA序列,设计DNA模板,然后使用体外转录技术合成生物素标记的RNA探针,并与蛋白提取液进行孵育,形成RNA-蛋白质复合体。
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体内RNA亲和纯化(RAP)
体内RNA亲和纯化(RNA Affinity Purification,RAP)是根据感兴趣的已知RNA序列,设计与RNA序列互补的生物素标记的DNA捕获探针,同时将RNA与蛋白质在体内进行交联,然后使用DNA捕获探针,将与目的RNA结合的复合物沉淀下来,进行LC-MS/MS检测,鉴定出目的RNA的结合蛋白。
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