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RNA免疫共沉淀测序(RIP-seq)
RNA免疫共沉淀测序(RNA Immunoprecipitation Sequencing, RIP-seq)是研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术。原理是利用目标蛋白的特异性抗体,将对应的蛋白-RNA复合体进行免疫沉淀,对分离纯化的RNA进行建库与高通量测序。
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荧光素酶互补实验(LCA)
荧光素酶互补实验 (Luciferase Complementation Assay, LCA)具有高灵敏度、可定量化、操作简单的优势,被广泛应用于植物学和动物学中验证蛋白质的相互作用研究。
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双分子荧光互补技术(BiFC)
双分子荧光互补(Bimo-lecular fluorescence complementation,简称BiFC)技术,可以直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用。
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酵母双杂交系统(Y2H)
酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)是将待研究的两种蛋白质A和B的编码DNA序列分别克隆(融合)到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域(B-BD)和转录激活域(A-AD)上,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。
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GUS染色实验
GUS(β-葡萄糖苷酶)染色实验是通过检测β-葡萄糖苷酶活性来研究植物组织中目标基因的表达情况,通常用于研究植物中特定基因的转录调控。因为绝大多数植物细胞内不存在内源GUS活性,因此GUS基因被广泛用作转基因植物的报告基因。 GUS是一种β-葡萄糖苷酶,能与底物X-葡萄糖苷(X-Gluc)在GUS的作用下被水解,生成可观察的蓝色产物。并且可以与底物4-甲基伞型酮-β-葡萄糖醛酸苷(MUG)反应产生荧光物质4-甲基伞型酮(MU),其含量可由酶标仪测出。因此,我们可以根据单位质量的植物总蛋白在单位时间内产生的荧光物质的多少来定量检测GUS的含量,进而检测启动子的表达强度。
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